Tại sao việc hiệu chuẩn máy quang phổ của bạn lại quan trọng đến vậy?

Tóm lại

Tại sao việc làm trốngquang phổVì mỗi giá trị hấp thụ mà bạn báo cáo chỉ đáng tin cậy như tham chiếu mà nó được đo.thiết lập đường cơ bản bằng cách đo một dung dịch tham chiếu trước, vì vậy các thiết bị trừ đi sự hấp thụ dung môi và cuvette và báo cáo chỉ những gì mẫu của bạn thực sự thêm. nhiều nhà điều hành giả định rằng quang học hiện đại làm cho trống không cần thiết,nhưng ngay cả các monochromator tốt nhất không thể tách phân tích từ ma trận của nó mà không có một tham chiếu được lưu trữ. Bỏ qua bước này và kết quả của bạn mang lại lỗi di chuyển ẩn có thể thay đổi tính toán nồng độ, bóp méo đường cong động học và thất bại kiểm toán.đường cong hiệu chuẩn tuyến tính và kết quả vượt qua kiểm tra quy định. Hướng dẫn này giải thích khoa học của trống, sai lầm tốn kém nó ngăn ngừa và làm thế nào Senova của hầu như hai chùm chùmMáy quang phổ UV nhìn thấyvà VB-600quang phổ nhìn thấy- làm cho việc quản lý cơ sở chính xác đơn giản bằng cách tự động làm bằng không bước sóng, trôi dạt tối thiểu và xác nhận sẵn sàng GLP.

Làm trống là gì?

Blanking là quy trình xác định tham chiếu hấp thụ bằng không của mộtquang phổTheo định luật Beer-Lambert,độ hấp thụ bằng logarit của tỷ lệ giữa cường độ ánh sáng đi qua một điểm tham chiếu (I0) và cường độ đi qua mẫu (I)Blank chứa tất cả các mẫu chứa ngoại trừ phân tích: cùng một dung môi, cùng một bộ đệm hoặc ma trận phản ứng, và một cuvette của cùng một vật liệu và chiều dài đường đi.Khi thiết bị bị trống, nó ghi lại cường độ tham chiếu này là 100% truyền, tương đương với độ hấp thụ bằng không.Vì vậy, giá trị báo cáo chỉ phản ánh ánh sáng được hấp thụ bởi bản thân phân tích.

Về mặt quang học, làm trắng bù đắp cho ba đóng góp không thể tránh khỏi. Thứ nhất, chính cuvette phản xạ và hấp thụ một lượng nhỏ ánh sáng, và không có hai cuvette nào hoàn toàn giống hệt nhau. Thứ hai,ma trận dung môi hoặc phản ứng hấp thụ ở các bước sóng nhất định, đặc biệt là bộ đệm trong vùng cực tím và nước trên 900 nm.quang phổ nhìn thấybao gồm 320 đến 1100 nm, điều chỉnh này quan trọng như vậy, bởi vì nước và nhiều bộ đệm hấp thụ mạnh mẽ trong vùng hồng ngoại gần.cửa sổ và cảm biến giới thiệu một phản ứng nền thay đổi theo bước sóng và tuổi đènMột khoảng trống chính xác hủy bỏ cả ba, để lại một đường cơ sở sạch mà trên đó đo lường mẫu chính xác có thể được xây dựng.

Trong một thiết kế chùm đơn, khoảng trống phải được đo và loại bỏ trước mỗi loạt mẫu. Trong một thiết kế chùm hai hoặc gần như chùm hai như Senova UB-600 và VB-600,hệ thống quang liên tục so sánh kênh lấy mẫu với kênh tham chiếu, ngăn chặn sự trôi dạt từ đèn và máy dò. ngay cả khi đó, người vận hành vẫn phải làm trống kênh mẫu với dung dịch tham chiếu chính xác,bởi vì dụng cụ không thể biết thành phần của ma trận của bạn bởi chính nó.

Định chuẩn cũng khác với hiệu chuẩn. hiệu chuẩn xây dựng một đường cong tiêu chuẩn chuyển đổi độ hấp thụ thành nồng độ bằng cách sử dụng các tiêu chuẩn đã biết,trong khi làm trắng chỉ đơn giản là xác định điểm không của thang đo quang họcCả hai bước đều bắt buộc trong các phương pháp được quy định, và mộtMáy quang phổ UV nhìn thấyvới một phím tự động bằng không, chẳng hạn như Senova UB-600, làm giảm nguy cơ lỗi của người vận hành ở bước quan trọng này.

Tại sao phải điều chỉnh các vật liệu làm trắng trong các phòng thí nghiệm hàng ngày

Trong các phòng thí nghiệm kiểm soát chất lượng bận rộn, việc làm trắng thường được coi là một thủ tục something một cái gì đó vội vàng trước khi các phép đo "thực sự" bắt đầu.lỗi offset có hệ thống không thể nhìn thấy trong một lần đọc nhưng rõ ràng trong một lô. Nếu trống là sai, mỗi mẫu thừa hưởng cùng một lỗi. một sự thay đổi hấp thụ 0,05 có thể trở thành một vài phần trăm sai nồng độ,có thể có nghĩa là sự khác biệt giữa việc phát hành và từ chối một lô sản xuất, hoặc giữa vượt qua và thất bại so sánh giữa các phòng thí nghiệm.

Rủi ro nhân lên trong ma trận thực sự. dung môi màu, chất phản ứng mờ, dấu vân tay trên vỏ, vết trầy xước trên cửa sổ quang học, bong bóng không khí và gradient nhiệt độ tất cả đều thêm sự hấp thụ giả.Không có một chỗ trống chính xácKhi kiểm toán hoặc khiếu nại của khách hàng đến, phòng thí nghiệm không thể giải thích dữ liệu,bởi vì điểm tham chiếu chưa bao giờ được xác định đúng cáchĐây là tình huống thúc đẩy các phòng thí nghiệm có kinh nghiệm tiêu chuẩn hóa quy trình làm trắng của họ và chọn các công cụ hỗ trợ nó.một đường cơ sở không xác định có thể vô hiệu hóa toàn bộ hồ sơ lô và buộc phải thử nghiệm lặp lại tốn kém.

Một chuyên giaquang phổbiến trống từ một khoản nợ thành một lợi thế. Thứ nhất, độ chính xác: UB-600 và VB-600 của Senova cung cấp độ phù hợp cơ bản là ± 0,001 Abs và trượt ≤ 0,001 Abs, vì vậy một khi trống được lưu trữ,đường cơ bản vẫn ổn định trong một phiên làm việc dàiThứ hai, độ tin cậy: với độ lặp lại bước sóng ≤ 0,1 nm, độ chính xác truyền ≤ 0,1 phần trăm T và ánh sáng lạc ≤ 0,05 phần trăm T,dụng cụ duy trì tính hợp lệ của trống trên toàn bộ phạm vi 190 đến 1100 nm.

Thứ ba, năng suất: màn hình cảm ứng 7 inch hướng dẫn người vận hành thông qua độ dài sóng tự động bằng không trong vài giây, loại bỏ phỏng đoán và biến đổi từ người vận hành sang người vận hành.Các mô-đun xác nhận GLP tích hợp kiểm tra độ chính xác quang học và độ chính xác bước sóngĐối với các phòng thí nghiệm tìm kiếm một nhà cung cấp quang phổ phòng thí nghiệm đáng tin cậy,Những tính năng này làm cho trống một điều khiển, quy trình có thể lặp lại và kiểm toán hơn là một nguồn lỗi.

Cho dù bạn chạy một phòng thí nghiệm quang phổ đầy đủ hoặc màu sắc hiển thị và kiểm tra nồng độ, Senova có một giải pháp: UB-600Máy quang phổ UV nhìn thấybao gồm 190 đến 1100 nm với đèn deuteri và tungsten, trong khi đèn VB-600quang phổ nhìn thấycung cấp sự ổn định chùm ánh sáng gần giống nhau trên 320 đến 1100 nm.Cả hai thiết bị đều được sản xuất thông qua một chu kỳ đảm bảo chất lượng 32 giai đoạn và được xây dựng trên khung hợp kim nhôm hạng hàng không vũ trụ với cột gương CNC.

Làm thế nào để làm trống đúng trong các luồng công việc thực tế

Trong kiểm soát chất lượng dược phẩm, làm trắng bắt đầu trước khi phân tích đầu tiên.và đặt nó vào vị trí mẫu. Trên Senova UB-600, người vận hành chọn bước sóng đo, nhấn phím tự động-số 0, và thiết bị lưu trữ khoảng trống như tham chiếu truyền 100%.Với băng thông quang phổ 2 nm và ánh sáng lạc ≤00, 05 phần trăm T, thậm chí dải hấp thụ hẹp của các thành phần hoạt chất được đo so với một đường cơ bản đáng tin cậy,cần thiết cho việc kiểm tra sự đồng nhất nội dung và phân giải khi quyết định giải phóng lô phụ thuộc vào độ chính xác quang học.

Trong công nghệ sinh học, định lượng axit nucleic dựa trên tỷ lệ A260/A280, và khoảng trống là bộ đệm pha loãng Tris, TE hoặc nước được đo trong cùng một cuvette thạch anh UV được sử dụng cho các mẫu.Các vỏ thủy tinh hấp thụ mạnh dưới 320 nm và sẽ làm hỏng đường cơ bản, đó là lý do tại sao Senova cung cấp cuvette thạch anh và một người giữ bốn vị trí có thể điều chỉnh từ 10 đến 50 mm.Các phân tích DNA và protein được lập trình trước của UB-600 áp dụng các điểm trống được lưu trữ tự động ở mỗi bước sóng chính, trong khi các nghiên cứu động học được làm trống ở bước sóng phản ứng trước khi chất nền được thêm vào, vì vậy tốc độ enzyme được tính từ một đường không ổn định.

Các phòng thí nghiệm môi trường và nước sử dụng chất phản ứng rỗng để điều chỉnh màu sắc do chất phản ứng tự tạo ra.,nhà phân tích chuẩn bị một chất phản ứng trống bên cạnh các tiêu chuẩn và các mẫu, trống dụng cụ, và sau đó xây dựng một đường cong tiêu chuẩn đa điểm với phù hợp toán học bậc cao.Máy quang phổ UV nhìn thấyxuất dữ liệu trực tiếp dưới dạng CSV, hồ sơ đầy đủ ¢ giá trị trống, đường cong và kết quả mẫu ¢ có thể được lưu trữ trong hệ thống quản lý thông tin phòng thí nghiệm mà không cần nhập lại.

Đối với các nhà sản xuất thực phẩm, đồ uống và sơn, một quétquang phổ nhìn thấynhư Senova VB-600 mang lại cùng một kỷ luật màu sắc và hóa học tầm nhìn.sau đó ghi lại đường cong quang phổ từ 320 đến 1100 nm để so sánh bóng, kiểm tra nồng độ và nghiên cứu ổn định. Đèn tungsten với theo dõi thời gian thực đảm bảo rằng nguồn ánh sáng không lão hóa vào một đường cơ sở trôi dạt giữa các khoảng thời gian bảo trì.

Người vận hành nên làm theo một danh sách kiểm tra đơn giản: làm nóng đèn trước khi làm trống, làm sạch và làm khô cuvette, lấp đầy nó ở chiều cao nhất quán và tránh chạm vào cửa sổ quang học.Re-blank bất cứ khi nào bạn thay đổi bước sóng, dung môi, chất phản ứng, cuvette hoặc chiều dài đường dẫn, và ở đầu mỗi lô. cho chạy động hoặc ổn định dài, theo dõi đường cơ sở và tái-zero nếu xuất hiện trôi. ngay cả trên các dụng cụ chùm hai,đối xử với trống như là neo của phép đo ️ quang học gần như hai chùm của UB-600 và VB-600 ức chế trượt, nhưng chỉ có một khoảng trống chính xác sẽ loại bỏ ma trận.

Nếu bất kỳ phương pháp nào yêu cầu bước sóng dưới 320 nm, chọn UB-600quang phổvới đèn deuterium và tungsten và phạm vi phủ sóng từ 190 đến 1100 nm. Nếu tất cả các phương pháp là tầm nhìn, VB-600 là lựa chọn kinh tế. Cả hai đều cung cấp băng thông 2 nm, độ chính xác bước sóng ± 0,3 nm,Các công cụ xác nhận GLP và xác định bước sóng tự động sẽ biến việc làm trống đúng từ một công việc hàng ngày thành một lợi thế cạnh tranh.

Câu hỏi thường gặp

• Làm trống quang phổ có nghĩa là gì?

  Blanking thiết lập điểm tham chiếu bằng cách đo một dung dịch trống chứa tất cả mọi thứ ngoại trừ analyte.do đó, các phép đọc mẫu tiếp theo chỉ cho thấy độ hấp thụ được góp phần bởi bản thân phân tíchNó là bước đầu tiên thiết yếu của mọi phép đo quang học chính xác.

• Tại sao chỉ số lại bị trôi dạt nếu tôi không làm trống thiết bị?

  Nếu không làm rỗng, độ hấp thụ của dung môi, cuvette và hệ thống quang học được đưa vào mỗi lần đọc.tạo ra các lỗi bù đắp tăng lên trong một chuỗi dài và làm sai lệch kết quả nồng độ. Việc làm trống lại thường xuyên hủy bỏ các hiệu ứng này. Trong những trường hợp cực đoan, một đường cơ sở không được làm trống thậm chí có thể tạo ra các giá trị hấp thụ âm khiến dữ liệu không thể sử dụng được.

• Tôi nên sử dụng dung dịch nào như một chỗ trống?

  Chất rỗng phải phù hợp với ma trận mẫu chính xác: cùng loại dung môi, bộ đệm, phản ứng và cuvette, nhưng không có chất phân tích.Chuẩn bị một chất phản ứng trắng theo cùng cách như các mẫuSử dụng các loại thạch anh UV dưới 320 nm, vì thủy tinh hấp thụ ánh sáng cực tím và làm hỏng đường cơ sở.

• Tôi nên làm lại bao nhiêu lần trong một loạt các phép đo?

  Re-blank bất cứ khi nào bạn thay đổi bước sóng, dung môi, cuvette hoặc chiều dài đường dẫn, sau khi đèn nóng lên, và ở đầu mỗi lô.Kiểm tra đường cơ bản định kỳ và tái bằng nếu xuất hiện sự trôi dạt. Senova thiết bị lưu trữ đường cơ sở và báo cáo tình trạng tuổi thọ của đèn tự động. Một thói quen nhất quán ngăn chặn một lô toàn bộ bị vô hiệu hóa bởi một 0 trôi.

• Sự khác biệt giữa làm trắng và hiệu chuẩn là gì?

  Blanking xác định điểm tham chiếu bằng không, hoặc độ truyền 100% cho các phép đọc hấp thụ, trong khi hiệu chuẩn xây dựng một đường cong tiêu chuẩn chuyển đổi hấp thụ thành nồng độ bằng các tiêu chuẩn đã biết.Cả hai đều cần thiết: làm trắng đảm bảo mỗi phép đo là chính xác, và hiệu chuẩn đảm bảo kết quả nồng độ cuối cùng là chính xác.Hầu hết các phương pháp quang đo được quy định đều xác định cả hai bước trong các quy trình bằng văn bản của họ.

• Máy quang phổ chùm đôi vẫn cần làm bằng tay không?

  Vâng. Một thiết kế chùm hai hoặc gần như chùm hai liên tục bù đắp cho đèn và máy dò, nhưng kênh mẫu vẫn phải được làm trống bằng dung dịch tham chiếu chính xác.UB-600 và VB-600 của Senova thêm độ dài sóng tự động để làm cho bước này nhanh hơnĐiều này loại bỏ nguồn phổ biến nhất của lỗi cơ bản phụ thuộc vào người vận hành trong các phòng thí nghiệm thông thường.

Kết luận

Blank không phải là một thủ tục; nó là nền tảng của dữ liệu quang học đáng tin cậy.Cuvette và nền thiết bị để mỗi giá trị hấp thụ chỉ phản ánh analyte, bảo vệ các quyết định phát hành lô, kết luận nghiên cứu và hồ sơ kiểm toán.Máy quang phổ UV nhìn thấyvà VB-600quang phổ nhìn thấykết hợp các công cụ xác thực bước sóng tự động, trôi dạt ≤ 0,001 Abs, băng thông 2 nm và GLP, do đó bất kỳquang phổngười dùng có thể trống chính xác trong vài giây và đo lường với sự tự tin suốt cả ngày.

Sẵn sàng chuẩn hóa các phép đo quang phổ của bạn?một danh mục sản phẩm hoặc lời khuyên ứng dụng team nhóm của chúng tôi sẽ giúp bạn lựa chọn giữa UB-600 và VB-600 và thiết lập một giao thức trống phù hợp với phương pháp của bạn.